کاربردهای دستگاه الایزا ریدر :

 

این تکنیک کاربردی مستقیم در ایمنولوژی و سرولوژی دارد

تایید حضور آنتی بادی ها و آنتی ژن های یک عامل عفونی و یا هورمونی

اثبات وجود آنتی بادی های اختصاصی یک واکسن

اتو آنتی بادی ها در نمونه

جهت انجام آزمایش الایزا لوازم ذیل مورد استفاده قرار میگیرد :

 

• دستگاه الایزا ریدر

• میکروپلیت واشر ( شستشو دهنده جاهک ها )

• سمپلر

• انکوباتور ( در برخی از تست ها نیاز به استفاده از محیط هایی با دمای 37 درجه می باشد.)

 

پروسه انجام آزمایش الایزا دارای مراحل ذیل می باشد :

مرحله ی اول : شستشوی پلیت که ممکن است با استفاده از میکروپلیت واشر انجام شود
مرحله ی دوم : استفاده از یک توزیع کننده مایع ( سمپلر )
مرحله ی سوم : پلیت در انکوباتور قرار داده می شود که دارای دمای کنترل شده بوده و واکنش ها در آن محل انجام می شود .
بسته به نوع 1و 2و 3 ممکن است چندین بار تکرار شوند تا این که معرف های اضافه شده واکنش ها را کامل کند.
سرانجام وقتی تمام مراحل انکوباسیون کامل شد پلیت به الایزا ریدر منتقل شده و سپس با قرائت جذب نوری نمونه ها نتیجه ی آنها مشخص می شوند .

انجام روش الایزا از لحاظ بیوشیمیایی:

1.  چاهک های پلیت با آنتی بادی و یا آنتی ژن پوشیده شده اند.

2. نمونه هـا، کنترلهـا و استانداردهـا به چاهکها افزوده شـده و متناسب با ویژگیهای آزمایش در درجه حرارت بین دمای اتاق و C°37  برای مدت زمان مشخص انکوبه میشوند.

در این مرحله آنتی بادی ها و آنتی ژن ها به یکدیگر اتصال پیدا میکنند و در این مرحله تعداد اتصال ها بسیار دارای اهمیت میباشد.

3. بعد از انکوباسیون، اتصالات غیر اختصاصی و آنتی ژن ها و آنتی بادی های آزاد توسط سیستم شستشو از محیط خارج می شوند.

4. سپس آنتی بادی دوم” که کونژوگه نام دارد اضافه می شود. این آنتی بادی دارای با یک آنزیم نشانه گذاری شده است که با واکنش با یک سوبسترا درمراحل بعد سبب تغییر رنگ می شود.

5. در ادامه، مرحله دوم انکوباسیون آغاز می شود که در آن کونژوگه به کمپلکس آنتی ژن – آنتی بادی در چاهک ها متصل می شود.

6. بعد از انکوباسیون، چرخه جدید شستشو آغاز می شود تا کونژوگه آزاد از چاهک خارج شود.

7. سوبسترا اضافه می شود. و با آنزیم نشانگذاری شده واکنش میدهد که این عمل سبب ایجاد رنگ آبی میگردد.

8. زمانی که انکوباسیون کامل شد، یک معرف افزوده می شود تا واکنش بین آنزیم و سوبسترا متوقف شده و تغییر بیشتری در رنگ به وجود نیاید. این معرف معمولا یک اسید رقیق است که سبب تغییر رنگ از آبی به زرد میکردد.

9. در نهایت پلیت با خوانشگر که همان دستگاه الایزا ریدر می باشد خوانده می شود و نتایج به دست آمده نمایانگر حضور آنتی ژن یا آنتی بادی و مقدار آن در نمونه است.

مراحل آماده سازی نمونه جهت انجام تست الایزا

 

• براي انجام تست ELISA بايد نمونه خون از بيمار گرفته شود و سرم آن جدا شود.

•  جهت به دست آوردن نتایج بهتر می بایست مواردی را در زمان تهیه نمونه رعایت نمود :

• از بستن گارو براي مدتي طولاني بايد اجتناب كرد چرا كه ممكن است در پارامترهاي مورد اندازه گيري تاثير گذاشته و موجب بروز خطا شود.

• در هنگام جداسازي سرم نيز بايد دقت شود كه فيبرينوژن يا ذرات ديگر نباشد.

• پيش از انجام آزمايش بايد به كيفيت كيت هاي مورد مصرف توجه كرد، همچنين نگهداري آن‌ها بايد در دماي­2 الی 8 درجه سانتیگراد صورت گيرد.

•  تمامي محلول‌هاي موجود در كيت قبل از مصرف بايدخوب مخلوط شده و به دماي آزمايشگاه برسد و پس از استفاده به منظور افزايش پايداري، بلافاصله اجزاء كيت به يخچال منتقل شود.

• درحين انجام آزمايش بايد از نوسانات غير تدريجي دما در هنگام انكوباسيون، مانند باز بودن پنجره يا درب آزمايشگاه در محل آزمايش جلوگيري كرد.

•  از آنجا كه فريز و ديفريز كردن نمونه ها باعث كاهش سطح برخي از هورمون ها مي‌شود، بايد تا حد ممكن از اين كار پرهيز شود.

• پيش از اندازه گيري بايد كليه ابزارهاي مورد استفاده مانند نوك ابزار نمونه‌گيري و كيت ها استريل شوند. كه البته استفاده از ابزارهاي يكبار مصرف پيشنهاد مي‌شود و بايد قبل از استفاده لوله آزمايش هاي شيشه‌اي آن‌ها را با اسيد سولفوريك رقيق شستشو داده و با آب مقطري كه دوبار تقطير شده آبكشي انجام داد.

• از به كار بردن محلول‌هاي شستشوي نامناسب يا آب مقطر ناخالص بايد پرهيز كرد.

• ضمنا بايد از كاركرد صحيح دستگاه‌ها و تجهيزات مورد استفاده به عنوان مثال از صحت طول موج فيلترهاي خواننده ELISA (دستگاه الایزا ریدر )به كمك استفاده از ماده رنگي با ثبات، نظير بيكرومات پتاسيم يا عملكردصحيح دستگاه واشر ELISA اطمينان حاصل كرد.